紫・褐色・脱色・赤―4枚の写真で見抜くGram染色の手順

正解はaです

選択肢考察

1. ○a.  Gram染色

   Gram染色は、①クリスタルバイオレット液（紫）で染色 → ②ルゴール液（褐色）で媒染し、色素とヨウ素の複合体を作る → ③アルコールで脱色 → ④サフラニン液（赤）で後染色、という手順をとる（施設によってはサフラニンの代わりにパイフェルの希釈フクシン液を用いる変法もある）。写真①〜④の色の順（濃紫→褐色→淡紫→赤）はこの手順と一致する。細胞壁の厚いペプチドグリカン層をもつグラム陽性菌は脱色されずに濃い紫色に、ペプチドグリカン層が薄く外膜をもつグラム陰性菌は脱色されてサフラニンで赤色に染まる。

2. ×b.  H-E染色

   H-E（ヘマトキシリン・エオジン）染色は、病理組織標本の最も基本的な染色法である。ヘマトキシリン（青紫色）で核を染め、水洗（色出し）したのちエオジン（桃色〜赤色）で細胞質や膠原線維を染め、アルコールで脱水しキシレンで透徹して封入する。ルゴール液（褐色）による媒染の工程はなく、写真②の褐色の液が説明できないため該当しない。

3. ×c.  May-Giemsa染色

   May-Giemsa染色は、血液塗抹標本や骨髄標本の観察に用いられるRomanowsky系の染色である。May-Grünwald液（メチレンブルーとエオジンを含む）で固定・染色し、リン酸緩衝液で処理したのち、Giemsa液で重ねて染色し水洗する。核は青紫色、細胞質は好塩基性なら青色、好酸性顆粒は橙赤色に染まる。ルゴール液による媒染やアルコールによる脱色の工程はないため該当しない。

4. ×d.  Papanicolaou染色

   Papanicolaou染色は、子宮頸部や喀痰などの細胞診に用いる染色法である。標本を95%エタノールで湿固定したのち、ヘマトキシリンで核を染め、OG-6（オレンジGを含む）とEA液（エオジンY、ライトグリーン、ビスマルクブラウンを含む）で細胞質を染め分け、脱水・透徹して封入する。角化した細胞質は橙色、表層の扁平上皮細胞は桃色、中層〜深層の細胞は青緑色に染まる。工程が多く、写真のような4段階の紫→褐色→脱色→赤の流れにはならない。

5. ×e.  Ziehl-Neelsen染色

   Ziehl-Neelsen染色は、結核菌などの抗酸菌を検出する抗酸染色である。石炭酸フクシン液（赤色）をのせて加温しながら染色 → 水洗 → 塩酸アルコールで脱色 → メチレンブルー液（青色）で後染色、という手順をとる。細胞壁にミコール酸を多く含む抗酸菌は酸・アルコールでも脱色されずに赤色に、それ以外の菌や細胞は青色に染まる。最初が赤、最後が青であり、写真（最初が紫、最後が赤）とは色の順が逆であるため該当しない。